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　　離心機(jī)在植物組織蛋白質(zhì)提取中的應(yīng)用講解.

　　本文講解的提取方法是采用三氯醋酸—丙酮沉淀法，詳細(xì)步驟如下：

　　1、在液氮中研磨葉片

　　2、加入樣品體積3倍的提取液在-20℃的條件下過夜，然后離心機(jī)離心（4℃8000rpm以上1小時(shí)）棄上清。

　　3、加入等體積的冰浴丙酮（含0.07%的β-巰基乙醇），搖勻后離心機(jī)離心（4℃8000rpm以上1小時(shí)），然后真空干燥沉淀，備用。

　　4、上樣前加入裂解液，室溫放置30分鐘，使蛋白充分溶于裂解液中，然后離心機(jī)離心（15℃8000rpm以上1小時(shí)或更長時(shí)間以沒有沉淀為標(biāo)準(zhǔn)），可臨時(shí)保存在4℃待用。

　　5、用Brandford法定量蛋白，然后可分裝放入-80℃?zhèn)溆谩?/p>

　　藥品：

　　提取液：含10%TCA和0.07%的β-巰基乙醇的丙酮

　　裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml滅菌的去離子水中（終體積為5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。

　　這種方法針對雙向電泳，雜質(zhì)少，離子濃度小的特點(diǎn)！當(dāng)然單向電泳也同樣適用，只是電泳的條帶會(huì)減少！

　　注意在離心機(jī)的使用過程中，都必須遵循一些安全要求：

　　轉(zhuǎn)鼓的強(qiáng)度計(jì)算應(yīng)符合JB／T 8105使用范圍所界定的規(guī)定，其結(jié)構(gòu)及各零、部件，必須有足夠的強(qiáng)度、剛度和穩(wěn)定性。

　　應(yīng)保證在規(guī)定的工作條件下，運(yùn)行安全可靠，并且操作維護(hù)方便，在操作人員遵守操作規(guī)程的條件下，安全防護(hù)裝置應(yīng)確保人身的安全。

　　在按規(guī)定條件制造、安裝、貯運(yùn)和使用時(shí)，不得對人身安全構(gòu)成威脅和造成傷害。

　　離心機(jī)密閉防爆要求

　　1）處于密閉、易燃、易爆環(huán)境或潮濕環(huán)境下工作的離心機(jī)，應(yīng)符合密閉、防燃、防爆、防濕等有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)或法規(guī)的要求。

　　2）處于密閉、易燃、易爆環(huán)境或潮濕環(huán)境下工作的離心機(jī)，應(yīng)有可靠的安全防護(hù)措施。

　　上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司作為經(jīng)驗(yàn)豐富的離心機(jī)廠家，在設(shè)計(jì)制造離心機(jī)以及培訓(xùn)使用離心機(jī)的時(shí)候，嚴(yán)格按照以上要求執(zhí)行！