大腸桿菌發(fā)酵與收集的實(shí)驗(yàn)步驟
發(fā)布時(shí)間：2014-9-12 11:34:42??????點(diǎn)擊：
1、種子接種：將凍干管或甘油管種子接種到LB培養(yǎng)基搖瓶中進(jìn)行活化，一般可以加抗性標(biāo)記對(duì)應(yīng)的抗生素。然后搖床恒溫培養(yǎng)。
2、發(fā)酵培養(yǎng)基準(zhǔn)備：搖瓶的話好說(shuō)，滅菌鍋就行。發(fā)酵罐的話，要先將罐子清洗干凈，然后配料，然后滅菌。
3、將培養(yǎng)好的種子液，按一定的接種量接到發(fā)酵培養(yǎng)基中。如果是搖瓶發(fā)酵的話一般不用中控，時(shí)間到了放瓶即可。如果是發(fā)酵罐發(fā)酵的話，中間過(guò)程需要補(bǔ)料、調(diào)節(jié)PH值、控制好溶氧轉(zhuǎn)速等等。要注意取樣時(shí)樣液的密封性，如果樣液到處亂撒，容易導(dǎo)致噬菌體污染。
4、不論是產(chǎn)酶、蛋白、氨基酸還是別的什么，產(chǎn)物量都是必須檢測(cè)的哦。
5、放罐后，也要注意料液的收集、使用和滅活，嚴(yán)防噬菌體污染。
6、發(fā)酵好的大腸桿菌通過(guò)離心機(jī)高速分離20分鐘，離心內(nèi)腔溫度控制在4℃，去掉上清液，然后收集大腸桿菌，再進(jìn)行冷凍干燥。
收集大腸桿菌的關(guān)鍵儀器是選用離心的機(jī)器，上海盧湘儀離心機(jī)推薦選用GL-21M落地式高速冷凍離心機(jī)，配500ml*6的鋁合金角轉(zhuǎn)子，也可以選用GL-12M大容量冷凍離心機(jī)配1000ml*6的鋁合金角轉(zhuǎn)子。
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